细胞简介：

直肠是自缘起向上 15cm的一段大肠。直肠周围多脂肪、无纵带，位于膀胱和生殖器官的背侧。直肠横切面由内到外依次为：粘膜（上皮层，固有层，粘膜肌层），粘膜下层，肌层，外膜。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，肿瘤间质对肿瘤的发展有着重要作用。

成纤维细胞是肿瘤间质的重要组成成分 ,与肿瘤复发、转移等密切相关。肿瘤间质中成纤维细胞活化为癌相关成纤维细胞是肿瘤细胞-成纤维细胞相互作用过程中的一个重要过程,是成纤维细胞发挥肿瘤调节作用的关键。同时成纤维细胞的变化也与许多其他直肠密切相关。

细胞特性：

1）细胞来源于手术切除的正常直肠组织。

2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

永利集团网址推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和永利集团网址联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和永利集团网址联系，告知细胞的具体情况，以便永利集团网址的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

兔子血小板活化因子(PAF)ELISA 试剂盒

Rat angiopoietin receptor Tie1 (ANG-R-Tie1) ELISA Kit 大鼠血管生成素受体Tie1(ANG-R-Tie1)检测试剂盒

Humanhiston-H2bELISAKit 人组蛋白H2b(histon-H2b)检测试剂盒 进口分装

Humancytovillin/ezrin,CVL检测试剂盒人细胞绒毛蛋白/埃兹蛋白(CVL)检测试剂盒

组织INSULI激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Humanplasminogenactivatorinhibitor1，PAI-1ELISAKit人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)检测试剂盒

PLA2G12B重组小鼠 PLA2G12B / PLA2G13 蛋白 (His 标签) Protein

2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶联牛血清白蛋白 1mg2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶联牛血清白蛋白

USP46重组人 / 小鼠 USP46 蛋白 (N-SUMO) Protein

AK4 Protein Human 重组人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 标签)

LTBR Protein Rat 重组大鼠 LTBR / TNFRSF3 蛋白 (His 标签)

2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶联牛血清白蛋白 1mg2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶联牛血清白蛋白

AK4 Protein Human 重组人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 标签)

PLA2G12B重组小鼠 PLA2G12B / PLA2G13 蛋白 (His 标签) Protein

LTBR Protein Rat 重组大鼠 LTBR / TNFRSF3 蛋白 (His 标签)

USP46重组人 / 小鼠 USP46 蛋白 (N-SUMO) Protein

猪白介素1β (IL-1β)ELISA 试剂盒

Human ai Mi2 aibody (ai-Mi2-Ab) ELISA Kit 人抗Mi2抗体(ai-Mi2-Ab)检测试剂盒

PorcineN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 猪Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforALA/LCA(Humanai-lymphocytotoxicaibody)ELISAKit人抗淋巴细胞毒抗体

血液型纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)活性荧光定量检测试剂盒20次

MouseUreaplasmaurealyticumaibody,UU-AbELISAKit小鼠解脲脲原体抗体(UU-Ab)检测试剂盒

人直肠成纤维细胞中文名称   方法   规格

鸡β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISAKit   ELISA.  

鸡免疫球蛋白E(IgE)ELISAKit   ELISA.  

鸡免疫球蛋白A(IgA)ELISAKit   ELISA.