细胞简介：

肾小球为血液过滤器，肾小球壁构成过滤膜。肾小球过滤膜从内到外有三层结构：内层为内皮、中层为肾小球基膜、外层为上皮细胞层，上皮细胞又称足细胞，其不规则突起称足突，其间有许多狭小间隙，血液经滤膜过滤后，滤液入肾小球囊。在正常情况下，血液中绝大部分蛋白质不能滤过而保留于血液中，仅小分子物质如尿素、葡萄糖、电解质及某些小分子蛋白能滤过。

肾足细胞即肾小球上皮细胞，它附着于肾小球基底膜的外侧，连同肾小球基底膜和肾小球基膜一起构成了肾小球血液滤过屏障。又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞，体外培养的原代细胞不能增殖。

足细胞呈星型多突状，胞体较大，由胞体伸出许多突起，呈指状交叉覆盖于肾小球基底膜外表面，并通过黏附分子和蛋白多糖分子与肾小球基底膜相连。足细胞在正常情况下可以分泌肾小球基底膜的主要组成成分 IV型胶原和纤维连接蛋白,在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具有降解肾小球基底膜作用的基质金属蛋白酶和组织蛋白酶，从而在肾小球基底膜的代谢平衡中发挥重要作用。

细胞特性：

1）细胞来源于人正常肾脏组织。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白（PCK）或WT-1（Wilm'sTumorProtein）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：不规则，含足突细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

永利集团网址推荐使用 Delf 原代肾足细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

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磷酸化IKB α抗体  Anti-Phospho-NFKBIA (Tyr42)

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丝蛋白酶抑制剂B11抗体  Anti-SERPINB11

磷酸化DDX58抗体

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嗅觉受体5H2抗体

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神经细胞增殖和分化调控蛋白1抗体  Anti-NPDC1

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注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和永利集团网址联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和永利集团网址联系，告知细胞的具体情况，以便永利集团网址的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。