细胞简介：

人肝癌组织源分离自患有肝癌病人的肝癌组织；肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。原发性肝癌的病因及确切分子机制尚不清楚，目前认为其发病是多因素、多步骤的复杂过程，受环境和饮食双重因素影响。流行病学及实验研究资料表明，乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染、饮水污染、酒精、肝硬化、性激素、亚硝胺类物质、微量元素等都与肝癌发病相关。继发性肝癌（转移性肝癌）可通过不同途径，如随血液、淋巴液转移或直接侵润肝脏而形成疾病。

方法简介：

公司实验室分离的癌组织源采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人肝癌组织源经检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠淋巴毒素β(LTβ)检测试剂盒 ，英文名： LTβ ELISA Kit

Mouse inhibin A (INH-A) ELISA Kit 小鼠抑制素A(INH-A)检测试剂盒

RatEndomeiumAibody,EMAbELISAKit 大鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGamma-ECS(HumanGamma-glamylsysteinesyhetase)ELISAKit人γ谷氨酰半胱合成酶

细胞骨架(肌动蛋白微丝;F-ACTIN)绿色荧光染色试剂盒10次

RatProstaticAcidPhosphatase,PAPELISAKit大鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)检测试剂盒规格：96T/48T

APCS重组小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein

CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2 0.5mgCNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 环核苷酸阳离子通道蛋白α2抗原

BNIP3L重组人 BNIP3L 蛋白 Protein

F3 Protein Human 重组人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 (Fc 标签)

FZD1 Protein Mouse 重组小鼠 Frizzled-1 / FZD1 蛋白

CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2 0.5mgCNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 环核苷酸阳离子通道蛋白α2抗原

F3 Protein Human 重组人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 (Fc 标签)

APCS重组小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 Protein

FZD1 Protein Mouse 重组小鼠 Frizzled-1 / FZD1 蛋白

BNIP3L重组人 BNIP3L 蛋白 Protein

小鼠横纹肌辅肌动蛋白α (sm Actinin-α)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat thioredoxin (x) ELISA Kit 大鼠硫氧化还原蛋白(x)检测试剂盒

humanUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit 人高敏甲状腺素(u-T4)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

humanai-neuophilcytoplasmicaibody,cANCA检测试剂盒人抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)检测试剂盒规格：96T/48T

植物染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒(包括抗体)10次

humanulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit人高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)检测试剂盒规格：96T/48T

人肝癌组织源细胞小鼠β细胞素(BTC)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠β葡萄糖酸苷酶(βGD)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠β酚(β-naphthol)LISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和永利集团网址联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和永利集团网址联系，告知细胞的具体情况，以便永利集团网址的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。