实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人睾丸支持分离自睾丸；睾丸支持细胞又称Sertoli细胞，在体内呈不规则的高锥体形，细胞基部附着在基膜上，顶部伸至曲精小管腔面。它是生精细胞的支架，为其提供必需的营养物质，能合成与分泌雄激素结合蛋白，为其提供高浓度的雄激素环境等，还具有构成血-睾屏障，形成睾丸内微环境，调节发生等功能。睾丸支持细胞是睾丸的主要组成细胞，能分泌多种生长因子和免疫抑制因子，不仅可为提供营养支持和免疫保护，也能对其他细胞，如胰岛和神经细胞提供营养支持，而且当其与胰岛或神经细胞共移植时，也能够为这些细胞提供免疫保护，提高植活率。因此，睾丸支持细胞在细胞移植中具有广泛的应用前景。制备高活率的Sertoli不仅对Sertoli的基础研究有重要价值，而且在发生等领域有重要意义。

方法简介：

公司实验室分离的人睾丸支持采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人睾丸支持经Fas-L免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和永利集团网址联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和永利集团网址联系，告知细胞的具体情况，以便永利集团网址的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

豚鼠白介素6(IL-6)试剂盒   96T/48T

豚鼠白介素4(IL-4)试剂盒   96T/48T

豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)试剂盒   96T/48T

豚鼠白介素12(IL-12/P70)试剂盒   96T/48T

小鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat prostaglandin E1 (PGE1) ELISA Kit 大鼠前列腺素E1(PGE1)试剂盒

Humancirculatingimmunecomplex,CICELISAKit 人循环免疫复合物(CIC)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanbeta-siteAPP-cleavingenzyme2,BACE2试剂盒人β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(BACE2)试剂盒规格：96T/48T

植物总RNA化试剂盒(高多糖/酚)20次

HumanSurfactaProteinA，SP-AELISAKit人表面活性蛋白A(SP-A)试剂盒规格：96T/48T

CA4重组小鼠 Carbonic Anhydrase IV / Car4 蛋白 Protein

CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12 0.5mgCCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 单核细胞趋化蛋白5抗原

UBE2M重组人 UBE2M 蛋白 Protein

FST Protein Human 重组人 Follistatin / FST (FS288) 蛋白

CD8A Protein Rat 重组大鼠 CD8A / Lyt2 蛋白 (Fc 标签)

CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12 0.5mgCCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 单核细胞趋化蛋白5抗原

FST Protein Human 重组人 Follistatin / FST (FS288) 蛋白

CA4重组小鼠 Carbonic Anhydrase IV / Car4 蛋白 Protein

CD8A Protein Rat 重组大鼠 CD8A / Lyt2 蛋白 (Fc 标签)

UBE2M重组人 UBE2M 蛋白 Protein

人睾丸支持细胞大鼠血小板反应蛋白(THBS1)试剂盒 ，英文名： THBS1 ELISA Kit

Mouse coisol (Coisol) ELISA Kit 小鼠(Coisol)试剂盒

MouseUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAkit 小鼠型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanchemerinELISAKit人chemerin

细胞CHK2激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitsIgA大鼠分泌型免疫球蛋白A