实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人骨髓单个核分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓单个核细胞是骨髓中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是（mononuclear cell）单个核细胞，而不是（Monocyte）单核细胞。单个核细胞的体积、形态和比重与骨髓其他细胞不同，利用一定比例聚蔗糖和钠形成的等渗溶液作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，可将各种血细胞与单个核分离。

方法简介：

公司实验室分离的人骨髓单个核采用取骨髓、通过密度梯度离心法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人骨髓单个核经检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 半贴壁半悬浮

细胞形态 圆形

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和永利集团网址联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和永利集团网址联系，告知细胞的具体情况，以便永利集团网址的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠基质金属蛋白酶2(MMP2)检测试剂盒 ，英文名： MMP2 ELISA Kit

Mouse histamine (HIS) ELISA Kit 小鼠组胺(HIS)检测试剂盒

RatBladdeumoraigen,BTAELISAKit 大鼠膀胱肿瘤抗原(BTA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFAELISAKit大鼠

细胞胶原蛋白(collagen)比色法定量检测试剂盒20次

Ratmyeloperoxidase,MPOELISAKit大鼠髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒规格：96T/48T

TIMD4重组小鼠 TIM4 / TIMD4 蛋白 Protein

Caspase-6 (CT 0.5mgCaspase-6 (CT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原)

FAM3B重组人 FAM3B 蛋白 (Fc 标签) Protein

FABP3 Protein Human 重组人 FABP3 / H-FABP / M-FABP 蛋白

CSF1R Protein Rat 重组大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白

Caspase-6 (CT 0.5mgCaspase-6 (CT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原)

FABP3 Protein Human 重组人 FABP3 / H-FABP / M-FABP 蛋白

TIMD4重组小鼠 TIM4 / TIMD4 蛋白 Protein

CSF1R Protein Rat 重组大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白

FAM3B重组人 FAM3B 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human adrenergic receptor a1A (ADRA1A) ELISA Kit 人能a1A受体(ADRA1A)检测试剂盒

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植物细胞可溶性总蛋白制备试剂盒20次

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小鼠αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装